PCR實驗室又稱基因擴增實驗室,是分子診斷的基礎,也是進行PCR實驗的必備場所。近年來因分子診斷領域的不斷發(fā)展,如何規(guī)劃一個合格的實驗室是每一個pcr從業(yè)者首先要遇到的問題。
1、如何才能設計一個合格的PCR實驗室呢,簡單的說就是:各區(qū)獨立,注意風向,因地制宜,方便工作,同時也要注意標本的接收問題。
首先我們來看各區(qū)獨立。其含義就是PCR實驗室的四個區(qū)域(如果使用實時熒光定量PCR,則只需要三個區(qū),因為擴增和產(chǎn)物分析可以在同一個區(qū)域內解決)即試劑準備區(qū),標本制備區(qū),擴增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū),應該在物理上完全分開的各自獨立的區(qū)域,并且不能有連接各個區(qū)域的中央空調等會導致空氣流通的情況。物品的傳遞應采用高密封度的傳遞窗,一個合格的傳遞窗應該是雙開門的結構,當一側打開時另外一側自鎖無法打開,且艙內應配套紫外燈消毒功能,這樣就可以高效避免交叉污染。
第二是注意風向。由于PCR對原始靶核酸的擴增有一個指數(shù)級的增長,當檢測有陽性后,假如在開放式的環(huán)境下,很容易就形成了所謂的“氣溶膠污染”,為了防止這種污染的發(fā)生,就需要注意各實驗室區(qū)域內的氣流。一般來說,實驗室的空氣流通采用正壓或者負壓,按照試劑準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)方向空氣壓力遞減的方式進行通過壓差控制,使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染,并且降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。
各個實驗室與非潔凈區(qū)之間的閘間保持正壓,>10Pa,實驗與閘間之間的氣流組織方向為:試劑準備區(qū)空氣流向閘間,標本制備區(qū)流向閘間,而PCR擴增區(qū)氣流方向由閘間流向PCR擴增區(qū),純化區(qū)同理;同時按照試劑單向流方向,各個實驗室之間設計不同壓力梯度來實現(xiàn)單向氣流組織方向,由試劑準備區(qū)(+20Pa)、標本制備區(qū)(+15Pa)、擴增反應一區(qū)(-5Pa)、純化區(qū)(-10Pa)、擴增反應二區(qū)(-20Pa)、到后純化區(qū)(-25Pa)壓力逐漸降低,形成單向負壓壓力梯度。
第三就是因地制宜。PCR實驗室不是千篇一律的,要分析具體的情況制定符合自己當前的需求,合乎國家的標準即可,不必強求理想狀態(tài)。
最后是方便工作。PCR實驗室的建立離不開以人為本,在做到防止污染的情況下,應最大限度地考慮在日常檢測工作時是否方便。實驗室的過道能否方便日后新設備的進出,人員工作服和工作鞋的換穿是否方便。
2、實驗室的區(qū)域規(guī)劃好之后,根據(jù)需求我們可以進駐一下主要的實驗用品及耗材。按照實驗室的需求放置試驗臺,天平、冰箱、低溫冰箱、離心機、洗眼器、加樣器、振蕩器、紫外燈、冰箱、生物安全柜(或潔凈工作臺、或者排風柜排毒柜)、恒溫水浴、上下水設備、廢棄物容器、通風排風系統(tǒng)、水浴箱、核酸提取設備、實時熒光定量PCR儀等。
如有需要可直接撥打電話:13357726918(微信同號)
如需關注更多有關核酸檢測實驗室建設知識,請關注網(wǎng)站:http://www.meintoo.com/